Аффинная хроматография: в основном используется аффинность между образцом и иммобилизацией для достижения разделения.
В зависимости от полярности подвижной и неподвижной фаз ВЭЖХ можно разделить на нормально-фазовую хроматографию и обращенно-фазовую хроматографию.
Высокоэффективная жидкостная хроматография с нормальной фазой: Неподвижная фаза в колонке состоит из полярных соединений, таких как силикагель и оксид алюминия. При проведении хроматографии неполярные соединения элюируются первыми, потому что полярные соединения в образце имеют более сильное сродство к неподвижной фазе, поэтому время их удерживания в колонке больше, чем у неполярных соединений. Многие вещества можно анализировать с помощью нормально-фазовой хроматографии, но поскольку лекарства, продукты питания и другие биологические продукты в основном неполярны, они не так широко используются в повседневной жизни, как обращенно-фазовая хроматография.
Высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой: Неподвижная фаза состоит из неполярных соединений, таких как октадецилсилан, колонки C4 HPLC с обращенной фазой, C8, C18 и другие органические соединения. Подвижная фаза полярна. Поэтому соединения с высокой полярностью элюируются первыми, а соединения с низкой полярностью или без нее — последними.
ВЭЖХ в основном анализирует такие вещества, как лекарства, продукты питания и биохимические молекулы, и все они по своей природе являются полярными (водорастворимыми) веществами. Поэтому более широко используется обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография.
ВЭЖХ в основном анализирует такие вещества, как лекарства, продукты питания и биохимические молекулы, и все они по своей природе являются полярными (водорастворимыми) веществами. Поэтому более широко используется обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография.
В соответствии с различными принципами разделения ВЭЖХ можно разделить на следующие шесть типов.
Адсорбционная хроматография: использует принцип различной адсорбции и разделяет в соответствии с различным сродством компонентов в образце к неподвижной фазе.
Ионно-парная хроматография: к подвижной или стационарной фазе обращенно-фазовой хроматографии добавляют ионно-сопрягающий агент для образования «противоионов» с ионизируемыми компонентами в образце. Обычно используемыми агентами ионного спаривания являются пентан, гексан, гептан или октансульфонат.
Ионообменная хроматография: основана на обратимом обмене заряженными группами между неподвижной и подвижной фазами для достижения разделения. Ионообменные смолы используются для разделения образцов, содержащих заряженные ионы. Для анионов используется анионообменная смола; для катионов используется катионообменная смола. В основном используется для разделения кислотных и основных соединений.
Эксклюзионная хроматография: разделение компонентов в образце в порядке молекулярного размера. Хроматографическая колонка изготовлена из мягких гелей, таких как агароза, декстран, полиакриламид и т. д., а также могут использоваться полужесткие гели, такие как алкилдекстран и полистирол.
Хиральная хроматография: используется для разделения оптически активных изомеров в образце. Неподвижная фаза представляет собой химически связанный силикагель. Часто используется в медицине, биологии и других областях.
В соответствии с различными целями анализа ВЭЖХ можно разделить на аналитическую жидкостную хроматографию и препаративную жидкостную хроматографию.
- Аналитическая жидкостная хроматография: Качественный и количественный анализ компонентов смеси в основном проводится с использованием детектора.
- Препаративная жидкостная хроматография: в основном для разделения и очистки компонентов смеси. Препаративные колонки и объемы ввода больше, чем аналитические.
Как мы все знаем, разделение смеси осуществляется путем протекания подвижной фазы через колонку ВЭЖХ, где подвижной фазой может быть один растворитель или смешанный растворитель, поэтому ВЭЖХ можно разделить на изократическую элюцию и градиентную элюцию.
- Изократическое элюирование: используется только один растворитель, и все операции выполняются в одном растворителе.
- Градиентное элюирование: Подвижная фаза состоит из двух или более растворителей, и соотношение их концентраций постоянно меняется.