Agilent Altura: зачем колонке для ВЭЖХ ультраинертная поверхность

Altura — семейство колонок Agilent, объединённых технологией Ultra Inert: специальным покрытием металлических поверхностей, контактирующих с образцом. В линейку входят колонки для разных механизмов разделения, в том числе обращённо-фазовой, гидрофильной и эксклюзионной хроматографии. Их общая особенность — уменьшение нежелательного взаимодействия анализируемых веществ с металлом.

Для хроматографиста это вполне практическая задача. Пептид введён в систему, но часть его молекул задерживается на активных участках металлической поверхности. До детектора доходит меньше вещества, пик приобретает хвост, а его площадь меняется от инъекции к инъекции. Особенно заметными такие потери становятся при работе с малыми концентрациями.

Покрытие Ultra Inert блокирует активные металлические центры. Стальной корпус сохраняет прочность, а поверхность проточной части колонки становится менее склонной к неспецифической адсорбции. Именно этот эффект Agilent исследует в своих прикладных работах — на пептидах, антителах и других сложных образцах.

Белки: эксперимент, в котором меняли поверхность колонки

В эксклюзионной хроматографии молекулы разделяются по размеру в растворе. Дополнительное взаимодействие белка с поверхностью колонки способно нарушить эту картину: появляется хвост пика, меняются удерживание и извлечение.

В работе Altura Size Exclusion 300 Å Allows Significant Gains in Performance at Low Salt Concentrations исследователи использовали один и тот же лот SEC-сорбента, упакованный в обычную стальную и ультраинертную конструкции. Такое сравнение позволяет оценить вклад покрытия отдельно от свойств сорбента.

Разница зависела от белка и состава элюента. Например, для конъюгата антитела с лекарственным веществом — сацитузумаба говитекана — при добавлении 100 мМ NaCl фактор асимметрии составил 13,70 на обычной колонке и 1,90 на Altura. При высокой концентрации соли результаты сближались. Это хорошо показывает, почему преимущества инертной поверхности следует рассматривать вместе с условиями метода.

Кратко о методе: SEC 300 Å, 4,6 × 300 мм, 2,7 мкм; 50 мМ фосфатный буфер pH 7,0 с разными добавками NaCl; расход 0,35 мл/мин, температура 25 °C, УФ-детектирование при 220 нм.

Полная работа Agilent, 5994-9268EN →

Антитела и ADC: сколько инъекций потребуется до стабильного сигнала

Другой показательный эксперимент описан для Altura PLRP-S 1000 Å. Это широкопористая обращённо-фазовая колонка с полимерным сорбентом для анализа белков и пептидов.

При последовательных введениях сацитузумаба говитекана стабильный сигнал на Altura достигался примерно к третьей инъекции. Обычной стальной колонке потребовалось около двадцати введений, чтобы приблизиться к сопоставимому отклику.

Для лаборатории за этим стоят расход образца и время подготовки к измерениям. Особенно чувствительна такая разница при работе с дорогостоящими биофармацевтическими веществами.

Кратко о методе: PLRP-S 1000 Å, 2,1 × 50 мм, 5 мкм; вода и ацетонитрил с 0,1% муравьиной кислоты; расход 0,21 мл/мин, температура 65 °C; детектирование на Q-TOF-масс-спектрометре.

Полная работа Agilent, 5994-9322EN →

Семаглутид и другие терапевтические пептиды: что скрывается рядом с главным пиком

У пептидных препаратов примесь может отличаться от основного вещества всего одной аминокислотой или результатом окисления. Разделить такие соединения бывает непросто.

В исследовании Impurity Profiling of GLP-1 Receptor Agonists by HILIC-MS авторы применили Altura Poroshell HILIC-Z для анализа эксенатида, семаглутида и тирзепатида. HILIC даёт другую селективность по сравнению с обращённо-фазовой хроматографией и помогает исследовать состав образца с дополнительной стороны.

Один из примеров — окисление эксенатида. Масс-спектрометрия показала увеличение массы на 16 Да, а на хроматограмме наблюдалась частично разделённая пара продуктов окисления. Авторы также обнаружили малые примеси, интегрирование которых по УФ-хроматограмме было затруднено.

Кратко о методе: Altura Poroshell HILIC-Z, 2,1 × 150 мм, 2,7 мкм; водная фаза — 100 мМ формиат аммония pH 3, органическая — ацетонитрил; расход 0,4 мл/мин, температура 40 °C. Использовали биосовместимую систему, УФ- и масс-спектрометрическое детектирование.

Исследование HILIC-MS, 5994-8315EN →

Для тех же классов соединений опубликован и обращённо-фазовый подход. На Altura Peptide Plus Agilent исследовала семаглутид, лираглутид, тирзепатид и ретатрутид, включая сравнение образцов от разных поставщиков. Использовали колонку 2,1 × 150 мм, 2,7 мкм, 15-минутный градиент воды и ацетонитрила с 0,1% муравьиной кислоты, температуру 60 °C и масс-спектрометр InfinityLab Pro iQ Plus.

Исследование терапевтических пептидов, 5994-8951EN →

PFAS в воде: удержать самые короткие молекулы

Ультракороткоцепочечные PFAS создают другую аналитическую трудность: на обычной C18 они могут выходить близко к фронту растворителя. Дополнительно мешает фон, который поступает из растворителей и компонентов системы.

Для этой задачи Agilent представила Altura Poroshell 120 PFAS. Здесь инертная конструкция сочетается со специально разработанной фазой со смешанным механизмом удерживания.

В прикладной работе показан анализ PFAS диапазона C1–C18 за одну инъекцию. В схему включена задерживающая PFAS-колонка, позволяющая отделить системный фон от соединений, введённых с образцом.

Кратко о методе: аналитическая колонка 2,1 × 100 мм, 2,7 мкм; расход 0,4 мл/мин, температура 40 °C; водно-метанольный градиент, цикл 21 минута; тройной квадруполь с отрицательной электроспрей-ионизацией. Образцы воды фильтровали, подкисляли и смешивали с метанолом; объём инъекции составлял 100 мкл.

Анализ PFAS в питьевой воде, 5994-8895EN →

Что изменилось в линейке Agilent

Платформу Altura Agilent анонсировала в сентябре 2025 года. В январе 2026-го появилась специализированная версия Poroshell 120 PFAS, а в июле семейство расширилось колонками SEC и PLRP-S. Так ультраинертная конструкция стала доступна для нескольких разных аналитических задач.

Практический интерес к таким колонкам возникает там, где есть признаки потерь образца: нестабильная площадь первых инъекций, длительное кондиционирование, выраженные хвосты или слабый отклик чувствительных к металлам соединений. При этом оценивать стоит весь путь образца: в опубликованных работах инертные колонки часто используются вместе с биосовместимой проточной частью хроматографа.

Для подбора колонки Agilent направьте нам действующую методику, артикул используемой колонки или пример хроматограммы. Это поможет определить подходящую фазу, размеры и исполнение под вашу аналитическую задачу.